T/HXCY 020-2020 杂交构树组培快繁技术规程

3　术语和定义
LY/T 2041-2012 界定的术语和定义适用于本文件。除引用的术语和定义外，本标准的术语还包括下面1个。
3.1 丛生芽 Shoot clump
多个基部相连的离体小芽组成的一团芽。培养外植体时，加入细胞分裂素之后，外植体会被诱导产生丛生芽。
4　外植体选择与处理
4.1 母株的选择
选取生长旺盛无病虫害的杂交构树苗作为母株。
4.2 外植体采集
4.2.1 4月初至11月份连续晴天3天以上的时间取材。
4.2.2 选取杂交构树当年新抽生的叶片或叶柄作为外植体。
4.2.3 当天取材当天消毒，如需进行长时间的储存和运输，将新取的材料放置在密封袋里，将密封袋置于冰盒里。
4.3 外植体的消毒
4.3.1 消毒前将外植体在自来水流水下冲洗10~15 min。用小毛刷刷净外植体小树枝上和叶片上的灰尘。
4.3.2 在超净工作台中，用75%的酒精消毒8~10 s，用无菌水冲洗一次。
4.3.3 用洁尔灭稀释15倍，消毒10~20 min。
4.3.4 用10%的次氯酸钠溶液，加吐温1~2滴消毒10 min。
4.3.5 用无菌水洗3~4次，至无次氯酸钠味道为止。
4.3.6 用高压灭菌过的滤纸吸干外植体上的液体，完成消毒过程。
4.3.7 消毒过程在超净工作台中进行；在用超净工作台之前需先打开紫外灯消毒30 min；所用到的镊子、剪刀等用接种器灭菌器360 ℃提前消毒30 min，取出待完全冷却后使用。
5　丛生芽诱导
5.1 外植体接种
5.1.1 将消毒完成的杂交构树叶柄用剪刀或刀切成0.5~2 cm的小段，叶片切成(1~2) cm×(1~2) cm，除去因消毒产生的变色部分，剪切完之后露出的幼茎段和叶片没有萎蔫，质地新鲜。将剪切好的外植体放置在丛生芽诱导培养基上。
5.1.2 整个过程在超净工作台进行，在用超净工作台之前需先打开紫外灯消毒30 min。所用到的镊子，剪刀等用接种器灭菌器，360 ℃提前消毒30 min，取出待完全冷却后使用。
5.2 丛生芽诱导培养基配制
丛生芽诱导培养基配方及配制方法见附录A和B，在培养基中添加NAA(0.3 mg/L) ，pH调至5.9。将配制好的培养基放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌条件是当气压达到 0.1 Mpa，温度升至121 ℃，灭菌15 min。在灭菌锅温度降到90 ℃以下可将培养基取出 。温度降到60 ℃以下，添加DPU(二苯基脲，2 mg/L)，将培养基在超净工作台里分装到培养皿里备用。
5.3 培养条件
放置外植体的丛生芽诱导培养基用parafilm封口膜封好，放在光周期为16 h光照（光照强度为1200~2000 lx），8 h黑暗，温度为26 ℃恒温培养箱中。
5.4 继代培养
放置在丛生芽诱导培养基上的外植体，每隔一个月继代在新的丛生芽诱导培养上。期间随时观察外植体的状态，如果有长菌的外植体，及时更换培养基，将未染菌部分继代至新培养基上。继代培养的温度和光照条件与丛生芽诱导相同。
5.5 培养时间
一般放置在芽诱导培养基上的外植体7 d左右会长出愈伤样的小颗粒，30 d左右每个小颗粒长出3~6个小芽。
6　生根培养
6.1 生根培养基配制
生根培养基具体成分及配制方法可以参考附录A和B，在培养基中添加植物激素NAA 和IBA浓度分别为0.5 mg/L和 0.1 mg/L，pH值5.9。将配制好的培养基放入高压灭菌锅进行灭菌，灭菌条件是当气压达到 0.1 Mpa，温度升至121 ℃，灭菌15 min。在灭菌锅温度降到90 ℃以下将培养基取出。温度降到60 ℃以下，将培养基在超净工作台里分装到直径为9 cm，高度14 cm或以上的培养瓶中备用。
6.2 诱导生根
待丛生芽长至1.5~2 cm，将丛生芽切下，接种至生根培养基里，每个培养瓶中接4~8 个小芽。
6.3培养条件
生根培养条件与丛生芽诱导培养条件相同。
6.4 培养时间
小芽在生根培养基中15~20 d会长出根。
7　移苗与炼苗
7.1 试管苗标准
生根瓶中的小苗长出2~4个根，每个根的长度大于4 cm，高度在5 cm以上，且小苗叶片颜色为绿色，质地均匀。苗高的测量方法参考LY/T 1770的计算方法。苗木茎生根部位到根尖部位的长度是根长。
7.2 试管苗清洗
将小苗从培养基中取出，在流水下洗净根上的培养基。利用LY/T 1770的方法处理废弃培养基。
7.3 移苗
移苗的基质可为黄心土、泥炭土、细沙或为轻质基质。基质在移栽前一天用0.1%的高锰酸钾消毒液消毒，或120 ℃高温灭菌。基质中添加基肥。育苗杯规格宜12 cm×10 cm或13 cm ×12 cm。将洗干净的苗移至装有基质的育苗杯中。移至土里的小苗，用高度为组培苗3~4倍的小竹竿撑起来，浇水保湿，外部用保鲜膜覆盖，留足空间，避免挤压构树小苗。
7.2.3 炼苗
炼苗时温度保持在15～30 ℃，光照强度3000～10000 lx，炼苗3~5 d在保鲜膜上戳口，7-10 d完全将保鲜膜揭开。
8　包装和运输
8.1 包装
将杯苗直立或横着放置在保鲜盒或塑料泡沫盒中，边缘用胶带封好，包装盒外用标签纸写好标签，标明品种、包装时间和内含有苗木数目等。
8.2 运输
运输过程中，环境温度保持在 15~30 ℃，运输时间不要超过4 d。
9　移植
移植时间为春、夏、秋季。选移植苗圃的要求参考GB/T 6001。移植方法参考 LY/T 1000。
10　苗木管理
移栽初期保持环境及根部湿度。若为夏季高温季节移栽，初期应控制光照强度，遮阳85%~90%为宜，中后期逐渐加强光照。移栽3周之后，每周可喷施或淋施0.1%的复合肥溶液1次。移植一个月内每7天轮流喷施多菌灵、百菌清等杀菌剂，防止小苗腐烂和发生病害。定期检查白蚁、地老虎、鼠害等，及时防治。合格苗的苗高25 cm以上，活叶片数4片以上，无病虫害。苗木质量的分级要求参见GB6000。
11 建档
建立杂交构树树苗档案，内容包括外植体采集时间、采集地点、天气状况、母株状况、外植体类型、采集数量等，可参照附录C。