标准编号：T/GDP 010-2020
标准名称：高纯度苦瓜素类化合物的制备技术标准
发布部门：广东省农药协会
起草单位：华南农业大学、广州禾立田生物科技有限公司、韶关禾立田农场有限公司、从化海关综合服务技术中心、韶关市曲江区田园农业科技发展有限公司、广州市会兴农业科技有限公司
发布日期：2020-12-28
实施日期：2020-12-28
标准状态：现行
标准格式：PDF
文件大小：422.21 KB
内容简介
利用柱过载临界点的多级液相色谱分离化合物，采用三级高效液相色谱分离，
（一）新鲜苦瓜茎叶干燥，研磨成粉；
（二）100%甲醇对苦瓜茎叶干粉进行浸提24 h，甲醇与苦瓜茎叶干粉的用量比为1: 5～10（g:mL）。浸提液过滤浓缩，得到粗提物；
（三）对粗提物进行一级高效液相色谱分离，分别收集18～26min时间段和30～42min时间段的流出液，浓缩，即得一级分离物1和一级分离物2；
（四）分别对一级分离物1和一级分离物2进行二级高效液相色谱分离，对于一级分离物1分别收18～22min时间段和24～26min时间段的流出液，干燥浓缩，得二级分离物1-1和二级分离物1-2，对于一级分离物2收集33～37min时间段的流出液，干燥浓缩，得二级分离物2-1；
（五）分别对二级分离物1-1、二级分离物1-2、二级分离物2-1进行三级高效液相色谱分离，分别收集20～24min时间段、23～26min时间段以及34～37min时间段的流出液，干燥浓缩，分别得到苦瓜素Ⅱ、苦瓜素L和苦瓜素Ⅰ。
（六）高效液相色谱分离的的参数为：流动相为80%甲醇、柱温度为28℃、流速为2.5mL/min、分离柱为Agilent XB-C18、检测波长为210nm。
获得了纯度达99%以上的苦瓜素类化合物，产率比以前的提取方法提高了100%，时间缩短为50h，大大缩短高效液相色谱分离所需的总时间，提纯过程耗时短、效率高 ，能定向高效大量地提纯制备高纯度的苦瓜素类化合物。
（一）新鲜苦瓜茎叶干燥，研磨成粉；
（二）100%甲醇对苦瓜茎叶干粉进行浸提24 h，甲醇与苦瓜茎叶干粉的用量比为1: 5～10（g:mL）。浸提液过滤浓缩，得到粗提物；
（三）对粗提物进行一级高效液相色谱分离，分别收集18～26min时间段和30～42min时间段的流出液，浓缩，即得一级分离物1和一级分离物2；
（四）分别对一级分离物1和一级分离物2进行二级高效液相色谱分离，对于一级分离物1分别收18～22min时间段和24～26min时间段的流出液，干燥浓缩，得二级分离物1-1和二级分离物1-2，对于一级分离物2收集33～37min时间段的流出液，干燥浓缩，得二级分离物2-1；
（五）分别对二级分离物1-1、二级分离物1-2、二级分离物2-1进行三级高效液相色谱分离，分别收集20～24min时间段、23～26min时间段以及34～37min时间段的流出液，干燥浓缩，分别得到苦瓜素Ⅱ、苦瓜素L和苦瓜素Ⅰ。
（六）高效液相色谱分离的的参数为：流动相为80%甲醇、柱温度为28℃、流速为2.5mL/min、分离柱为Agilent XB-C18、检测波长为210nm。
获得了纯度达99%以上的苦瓜素类化合物，产率比以前的提取方法提高了100%，时间缩短为50h，大大缩短高效液相色谱分离所需的总时间，提纯过程耗时短、效率高 ，能定向高效大量地提纯制备高纯度的苦瓜素类化合物。
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